A orquídea Aspasia variegata ocorre naturalmente no Cerrado Sul-Matogrossense, e tem sido bastante coletada de seu habitat, devido à beleza de suas flores. Adicionalmente, sua área de ocorrência tem sido bastante reduzida e pouco ou nenhum estudo visando a sua multiplicação tem sido realizado. Objetivando estabelecer protocolo para obtenção de mudas de A. variegata, diferentes composições de meio de cultivo foram testadas para observar aquela que propicia melhores condições para crescimento e desenvolvimento dos protocormos in vitro e ainda a influência desses meios na fase de aclimatização das mudas. Para tal, foram utilizadas cápsulas maduras para obtenção das sementes, as quais foram inoculadas em meio de cultivo básico Knudson por 120 dias até o desenvolvimento de protocormos. Estes foram então transferidos para diferentes formulações dos meios de cultivo MS e Knudson, variando a concentração de sais e de carvão ativado (0; 3,0 e 6,0g L-1). Após 180 dias da inoculação dos protocormos, foram realizadas avaliações referentes ao comprimento da maior raiz e da parte aérea, número de raízes e folhas, e quantificados os teores de clorofila. Em seguida, as mudas foram transferidas para bandejas contendo uma mistura de Plantmax® e Fibra de Coco (1:1) para aclimatização. Melhores resultados para o crescimento in vitro de A. variegata foram obtidos com a utilização do meio de cultura MS, acrescido de 6,0g L-1 de carvão ativado. No entanto, os maiores níveis de clorofila foram obtidos nos tratamentos contendo sais MS desprovidos de carvão ativado, e os menores nos meios contendo sais Knudson providos com carvão ativado. As plantas oriundas dos tratamentos com maiores teores de clorofila total durante a fase in vitro obtiveram as maiores taxas de sobrevivência e melhor desenvolvimento na fase de aclimatização.

Aspasia variegata occurs naturally in the savanna of the Mato Grosso do Sul State, Brazil and it has been widely collected for its beautiful flowers. Additionally, its habitat has been greatly reduced and little or no investigation of its spread has been performed. Aiming to establish a protocol to obtain seedlings of the orchid A. variegata, different compositions of culture medium were tested to identify which one provided better in vitro growth and development and to assess the influence of these media in seedling acclimatisation. Thus, seeds obtained from mature capsules were inoculated in Knudson culture medium for 120 days until the protocorm stage. They were transferred to different culture media formulations, including MS and Knudson with half or full formulation, and 3.0 and 6.0g L-1 activated charcoal were added to them or not. After 180 days of protocorm inoculation, seedlings were evaluated for length of roots and shoots, number of roots and leaves, and chlorophyll contents. After that, seedlings were transferred to trays containing a mixture of Plantmax® and coconut fibre (1:1) for acclimatisation. Best results for the in vitro growth of A. variegata were obtained with the use of MS medium supplemented with 6.0g L-1 activated charcoal. Higher levels of chlorophyll were obtained, however, in treatments containing MS salts without activated charcoal presence, and lower levels in media containing Knudson salts with the presence of activated charcoal. The seedlings originated by higher chlorophyll levels during in vitro cultivation presented the highest survival rates and better development in the acclimatisation phase.